Finalidade de Uso:
O ágar tríplice açúcar ferro é usado para a diferenciação de bacilos entéricos patogênicos gram-negativos através de sua capacidade de fermentar dextrose, lactose e sacarose e pela produção de sulfureto de hidrogênio.
Composição em g/L:
Digestão péptica de tecido animal: 10,00 Dextrose: 1,00
Caseína enzimática hidrolisada: 10,00 Cloreto de sódio: 5,00
Extrato de levedura: 3,00 Sulfato ferroso: 0,20
Extrato de carne bovina: 3,00 Tiosulfato de sódio: 0,30
Lactose: 10,00 Vermelho de fenol: 0,024
Sacarose: 10,00 Ágar: 12,00
pH Final (a 25ºC): 7,4 ± 0,2.
Base Científica:
Agar tríplice açúcar ferro foi primeiramente proposto por Sulkin e Willett (1) e modificado por Hajna (2) para identificação de Enterobacteriaceae. Esse meio é recomendado pela APHA para análise de carne e produtos alimentícios (3), análise de leite e laticínios (4) e testes de limites microbiais para identificar a presença de Salmonella (5,6) e na identificação de bacilos gram-negativos (6,7).
A caseína enzimática hidrolisada, a digestão péptica de tecido animal e os extratos de levedura e carne fornecem compostos nitrogenados, sulfúricos, complexo de vitamina B e outros elementos. O cloreto de sódio mantém o equilíbrio osmótico do meio. A lactose, a sacarose e a dextrose são carboidratos fermentativos.
Tiosulfato de sódio e ferro ou íons ferrosos fazem o sistema indicador de H2S. O vermelho de fenol é indicador de pH. Organismos que fermentam glicose produzem uma variedade de ácidos, mudando a cor do meio de vermelho para amarelo. Quantidades maiores de vácido são liberadas no fundo (fermentação) comparadas
com a produção na área inclinada (rampa; respiração). O crescimento bacteriano também forma produtos alcalinos da descarboxilação oxidativa da peptona que neutralizam o ácido presente no fundo. Portanto, a formação de uma área alcalina na inclinação rampa (vermelha) e de uma área ácida (amarela) no fundo do
tubo após a incubação, indica que o microorganismo é fermentador de glicose, mas não é capaz de fermentar lactose e/ou sacarose. Bactérias que fermentam lactose e/ou sacarose, além de glicose, produzem grandes quantidades de ácido, causando a não reversão do pH naquela região e portanto os tubos exibem a coloração
amarela tanto na inclinação (rampa) quanto no fundo devido ao pH ácido. A produção de gás (CO2) é detectada pela presença de bolhas, quando o gás acumulado escapa. O tiosulfato é reduzido a sulfureto de hidrogênio por várias espécies de bactérias. O H2S combina-se com íons de ferro e sais de ferro para produzir
o precipitado preto insolúvel de sulfeto de ferro. A redução do tiosulfato ocorre apenas em ambiente ácido e o enegrecimento ocorre normalmente no fundo do tubo. O ágar tríplice açúcar ferro deve ser usado em paralelo
com ágar/caldo uréia (M112/M111) para distinguir entre espécies de Salmonella e Proteus. As reações podem ser resumidas assim:
Inclinação alcalina/fundo ácido - fermentadores somente de glicose
Inclinação ácida/fundo ácido - fermentadores de glicose e sacarose ou de glicose e lactose, ou de todos os 3 açúcares.
Bolhas - produção de gás.
Precipitado preto - produção de H2S.
Alguns membros de Enterobacteriaceae e Salmonella produtoras de H2S podem não ser H2S positivas no agar TSI. Algumas bactérias podem mostrar produção de H2S no ágar ferro Kligler, mas não no ágar TSI. Isso pode ocorrer porque a utilização da sacarose no ágar TSI suprime a ligação enzimática que resulta na produção de H2S.
Procedimento de Preparação do Meio de Cultura:
Dissolva 64,52 gramas em 1000 mL de água destilada. Aqueça até ferver para dissolver o meio completamente. Misture bem e distribua em tubos teste. Esterilizar autoclavando a 1 atm de pressão a 121ºC por 15 minutos. Deixe os tubos em posição inclinada com a extremidade mais grossa (fundo) com 2,5 cm de comprimento. Nota: para melhores resultados, o meio pode ser esterilizado a 0,7 atm (115°C) por 15 minutos.
Controle de qualidade:
Aparência do pó:
Pó amarelo claro a rosa, homogêneo e livre circulante.
Solidificação:
Gel firme, comparável com gel de ágar 1,2%.
Cor e transparência do meio preparado:
Cor vermelho rosado, transparente a levemente opalescente.
Reação:
A reação de 6,5% de solução aquosa tem pH final de 7,40 ± 0,2 a 25oC.
Condições de Armazenamento:
Armazenar o pó a temperatura ambiente (abaixo de 30ºC) e o meio preparado de 2°C a 8ºC.Usar antes de expirar a data de validade.
Validade: 5 anos.
